Колориметриялык метод - изилденген жана белгилүү заттардын түскө каныккандыгын салыштырууга негизделген анализ. Физикалык жана химиялык сыноолордун натыйжалары илимдин көптөгөн тармактары үчүн чоң мааниге ээ, бирок изилдөөлөрдүн көбү медицинада колдонулат.
Колориметрикалык методдун маңызы
Заттардын химиялык курамын аныктоочу сыноолордун көптөгөн түрлөрү бар. Алардын айрымдары универсалдуу жана ар кандай тармактарда кеңири колдонулат, башкалары конкреттүү, жогорку тактык менен. Колориметрдик ыкма универсалдуу.
Анализдин маңызы белгисиз концентрациядагы эритменин түскө каныккандыгы стандарттуу эритменин түсү менен салыштырылганында. Анализ учурунда изилденүүчү компоненттин белгилүү бир реагент менен өз ара аракеттенүүсүнүн натыйжасында түстүү кошулма пайда болот. Реакция аяктагандан кийин пайда болгон көлөкө концентрациясы белгилүү болгон эритмелердин түсү менен салыштырылат.
Колориметриянын негиздөөчүсү Роберт Бойл деп эсептелет. Ал кысууну колдонгонэритмедеги темирди жезден айырмалоо үчүн таниндер. Эритмедеги темирдин концентрациясы канчалык көп болсо, анын тонусу ошончолук бай болорун Бойл байкаган.
Колориметрия
Колориметрия – эритмелердеги заттын көлөмүн аныктоо ыкмасы. Анализ Бугер-Ламберт-Бир мыйзамына негизделген: жарык шооласы заттын тыгыз жутуучу катмарына тийгенде, анын интенсивдүүлүгү начарлайт.
Заттын концентрациясын аныктоонун колориметриялык ыкмасы түстүү интенсивдүүлүктү өлчөө үчүн атайын аспаптардын жардамы менен визуалдык салыштырууну же салыштырууну колдоно алат. Салыштыруу түз жана компенсациялык жол менен жүргүзүлөт.
- Түз. Метод суюктуктун белгилүү бир тыгыздыгында жана температурасында сыналуучу эритменин түсүнүн деңгээлин эталондук эритме менен салыштырууну камтыйт. Фотоколориметрлерди жана спектрофотометрлерди колдонууда эталондук эритме катары дистилденген суу колдонулат. Түзмөктөр жарыктын интенсивдүүлүгүнө жараша токтун интенсивдүүлүгүн өлчөйт.
- Компенсациялык. Метод изилденген үлгүнүн түсүн шилтемеге алып келүүгө негизделген. Натыйжага эриткичти кошуу же боёлгон чөйрөнүн катмарынын бийиктигин жогорулатуу аркылуу жетишилет.
Спектрофотометрди, монохроматторду жана башка так приборлорду колдонуу изилдөөнүн жөнөкөй ыкмасын дагы жөнөкөйлөтүп, натыйжалардын тактыгын жогорулатууга мүмкүндүк берет. Бул аппараттар жарык өткөрүү көлөмүн өлчөп, толкун узундугун аныктай алат.
Талдоо колдонулган жерде
Анализдин колориметриялык ыкмасы так химиялык курамы белгилүү болгондо, салыштыруу үчүн эталондук үлгү болгондо жана сыноо менен эталондук үлгүнүн температурасы бирдей болгондо колдонулат. Эгер түстүү заттын көлөмүн тез аныктоо керек болсо, бирок ал аналитикалык ыкманы колдонуу мүмкүн болбогондуктан аз болсо.
Колориметрия медицинада клиникалык биохимиялык изилдөө жана башка тармактар үчүн кеңири колдонулат:
- фармацевтика өнөр жайы;
- тамак-аш жана спирт өнөр жайы;
- агрономия (кыртыштын сапатын аныктоо).
Плюс жана минус
Колориметрикалык ыкма, башка бардык сыяктуу, жакшы жана жаман жактары бар.
Артыкчылыктарга төмөнкүлөр кирет:
- талдоо жеңилдиги, минималдуу даярдоо процедуралары;
- аз сандагы сыноо материалы менен да сыноо мүмкүнчүлүгү;
- кымбат жабдуулардын кереги жок, бирок акыркы убакта арзан эмес заманбап түзүлүштөр көбүрөөк колдонулууда. Бирок алар эң так натыйжаны берет.
Кемчиликтери: аналитикалык методдорго салыштырмалуу анализдин тактыгы төмөн.
Белок аныктоо үчүн биурет ыкмасы
Кан сарысуундагы протеин гомеостаздын абалын чагылдырган көрсөткүч. Кандагы макромолекулярдык кошулманын концентрациясынын көбөйүшү гиперпротеинемия, аз болсо гипопротеинемия деп аталат.
Ичиндеги протеиндеркан сывороткалары башка составга, түзүлүшкө, касиетке ээ, ар кандай функцияларды аткарышат. Алар ферменттерге, гормондорго, иммуноглобулиндерге жана башкаларга бөлүнөт. Белоктордун бардык топтору бир катар жалпы мүнөздөмөлөргө ээ, алардын негизинде биологиялык суюктуктардагы макромолекулярдык органикалык бирикмелерди аныктоо методдору иштелип чыккан.
Клиникалык биохимиянын бардык ыкмаларынын ичинен белокту аныктоонун колориметриялык ыкмалары көбүнчө колдонулат. Алар салыштырмалуу арзан, бул бюджеттик уюмдар үчүн маанилүү. жана абдан жөнөкөй. Эң кеңири таралганы биурет ыкмасы. Методдун маңызы: щелочтуу чөйрөдөгү белоктор жез сульфаты менен реакцияга кирип, кызгылт көк бирикмелерди пайда кылат. Кандагы белоктун курамы боёктун каныккандыгы менен аныкталат. Анализ үчүн биоматериал эртең менен ач карын алынат.
Анализ абдан так, бирок кандагы белоктун концентрациясына таасир этүүчү факторлор бар:
- биоматериалдан үлгү алуудан бир аз мурун физикалык активдүүлүк;
- кош бойлуулуктун жана лактациянын акыркы апталары;
- кортикотропин, Мисклерон, клофибрат препараттарын колдонуу кандагы белоктун курамын жогорулатат, ал эми пиразинамидди жана эстрогенди колдонуу - концентрацияны азайтуу үчүн;
- биоматериалдан үлгү алууда колдун туура эмес абалы.
Темирди аныктоо
Кандагы темирдин өлчөмү ар кандай ооруларды аныктоодо негизги көрсөткүчтөрдүн бири болуп саналат. Зат гемоглобинде топтолгон, ал кычкылтектин кыртыштарга жеткирилишин камсыз кылат. үчүнтемирди колориметриялык ыкма менен аныктоодо негизги реагент катары көбүнчө батофенантролиндин эритмеси (0,02%) колдонулат. Биоматериал - гемолиз издери жок сыворотка.
Усулдун маңызы: темир иондору менен сульфатталган батофенантролиндин өз ара аракеттенүүсү түстүү комплексти түзөт, анын каныккандыгы фотометрикалык жол менен аныкталат. Так чечимди алуу үчүн биоматериалдан үлгү алуу эрежелерин сактоо керек, бирок темир-лиганддык комплекстердин оптикалык тыгыздыгын так аныктоо үчүн гидроксиламин жана жуучу каражаттарды (натрий додецил сульфаты) колдонуу менен темир гемоглобинден бөлүнүп чыгат. Тесттин жыйынтыгы патологиянын болушун жана даражасын аныктайт. Нормалдуу темир концентрациясы болушу керек:
- 14, 2 – 26,0 мкмоль/л (эркектер);
- 10, 6- 21, 7 мкмоль/л (аялдар).
Темирдин жетишсиздиги көбүнчө кан жоготуу, тамак-аштын жетишсиздиги же ичеги-карын трактынан начар сиңирүү менен коштолот.
Холестерин тест
Холестерин көптөгөн организмдердин, анын ичинде адамдардын клетка дубалында кездешүүчү органикалык зат. Бул cholecalciferol жана стероиддик гормондорду өндүрүү үчүн зарыл. 3,37-5,2 ммоль/л холестерол деңгээл нормалдуу деп эсептелет. Жогорку мазмун атеросклероздун негизги себептеринин бири.
Холестеринди аныктоонун колориметриялык ыкмалары кан тамыр ооруларын алгачкы этапта таанууга мүмкүндүк берет. Ишемиялардын өлүмгө алып келүүчү патоанатомиялык натыйжалары боюнча пациенттерде липофильдик спирттин концентрациясы6,5-7,8 ммоль/л болгон.
Колориметриялык методдун принциби холестерин 3бета-гидрокси-стероиддик оксидоредуктаза аркылуу кычкылданат, суутектин перекисин бөлүп чыгарат, ал р-аминотипиринди түстүү кошулмага айландырат. Холестеролдун мазмуну анын түсүнүн каныккандыгы менен аныкталат.
Балага анализ жүргүзүүдө балалык куракта холестериндин концентрациясы 4,1 ммоль/лден ашпашы керек экенин эске алуу керек.
Ферменттик колориметриялык ыкма деген эмне?
Ферменттик тесттер жогорку активдүүлүккө ээ ферменттердин реакцияларын колдонууга негизделген. Алар аналитикалык химияда түрдүү заттарды – нитрат иондорунан баштап макромолекулаларга чейин кеңири колдонулат.
Ферменттик (ферменттик) методдор спецификалык болуп, айрым заттарды курамы боюнча окшош башка заттардын катышуусунда анализдөөгө мүмкүндүк берет. энзим колдонууга негизделген таралган ыкмалары - глюкоза оксидаза. Сыноо кандагы глюкозанын концентрациясын аныктоо үчүн колдонулат. Тесттин тактыгы аны 2-тип кант диабети менен ооруган пациенттерде гипогликемиялык каражаттардын дозасын тууралоо үчүн колдонууга мүмкүндүк берет.
Глюкозаны оксиданттык ыкма глюкозаны аныктоонун эң мыкты сандык ыкмаларынын бири болуп эсептелет. Биоматериал катары канды да (капиллярды) да, сыворотканы да колдонсо болот, бирок плазманы жакшыраак, анткени анын гематокриттин мазмуну төмөн, бул натыйжанын тактыгына терс таасирин тийгизет.
Негизинен фотометриянын кинетикалык ыкмасы колдонулат. Анын маңызы мына ушундаглюкоза оксидаза менен пероксидазанын белгиленген катышы, реакция башталгандан кийин белгилүү бир убакыттын ичинде түстүү кошулманы түзүү ылдамдыгы үлгүдөгү глюкозанын деңгээлине ылайык келет. Сыноонун негизги артыкчылыгы - натыйжага үлгүдөгү үчүнчү тараптын кошулмаларынын болушу таасир этпейт. Методдун дагы бир кемчилиги бар - сыноо үчүн немис же швед өндүрүүчүлөрүнүн кымбат өлчөөчү аспаптары талап кылынат.
Тыянак
Колориметрикалык ыкма так жана колдонууга оңой. Аны медицинада колдонуу организмдеги түрдүү патологиялык өзгөрүүлөрдү эрте аныктоого мүмкүндүк берет. Жаңы технологияларды киргизүү менен ыкма жакшыртылып, барган сайын популярдуу болуп баратат.
