ПТР, же полимераздык чынжыр реакциясы, медицинада жана башка илимий тармактарда кеңири колдонулган татаал лабораториялык ыкма. ПЦР диагностикасы бир убакта илимде чыныгы ачылыш болуп калды.
Сыпаттама
Сандык ПТР – реалдуу убакыттагы ПТРдин бир түрү.
Бул ПТРдин варианты катары түшүнүлөт, анда реакциянын кинетикасы тынымсыз жазылып турат, бул татаал молекулалык аралашмадагы спецификалык ДНК нуклеотиддеринин ырааттуулугун сапаттык жактан баалоого мүмкүндүк берет.
Сандык ПТР ыкмасы төмөндө кеңири талкууланат.
Анализдин маңызы
Культуралык жана серологиялык ыкмалар өзгөчө инфекцияларды аныктоо үчүн колдонулат. Биринчисинде кандын сывороткасындагы инфекциялык козгогучка каршы антителолор аныкталат. Экинчиден, оорулуу адамдан алынган биологиялык материал патогендик колониялардын өсүшү үчүн жагымдуу белгилүү бир чөйрөнү себүү үчүн колдонулат. Экөө тең диагностикаиш күндөргө же жумаларга созулушу мүмкүн.
ПТР изилдөө оорулуу адамдан алынган ар кандай биологиялык материалдар менен жүргүзүлүшү мүмкүн. Кан жана башка патологиялык, физиологиялык жана биологиялык чөйрөлөр жана суюктуктар үлгү катары иштешет. Сиз ПЦР заңын же заараны жасай аласыз.
Атипикалык жана вирустук инфекциялар көбүнчө сандык ПЦР менен аныкталат, анткени алар козгогон патологиялык процесстин өзгөчөлүгүнөн улам диагноз коюу оңой эмес. Мындай инфекцияларды аныктоо үчүн убакыт талап кылынат, анын жүрүшүндө антителолор организмде серологиялык ыкмалар менен аныктала баштайт. Бирок бул кээ бир учурларда кабыл алынбайт.
Аткаруу ыкмасы
ПТР ыкмасы - пациенттен бөлүнгөн үлгүлөрдөгү инфекцияны лабораториялык аныктоо (in vitro).
Полимераздык чынжыр реакциясын жүргүзүү үчүн атайын реагенттердин топтому талап кылынат.
Сыноочу материал реагенттери бар пробиркаларга киргизилет. Пробиркалар атайын аппаратка - ПЦР күчөткүчүнө жайгаштырылат, ал керектүү РНК же ДНК фрагменттерин күчөтүү (санын көбөйтүү) үчүн арналган, ПТР күчөткүч циклдик режимде иштейт. Кандайдыр бир циклде, эгерде үлгүлөр патогендин РНК же ДНК ырааттуулугун камтыса, анда бул нуклеиндик кислоталардын бөлүкчөлөрүнүн көп көчүрмөлөрү эритмеде топтолот. Сиз патогендин бар экенин жана анын үлгүлөрүндөгү санын аныктай аласыз.
ПЦР түрлөрү
ПЦР боюнча сапаттуу анализ төмөнкү натыйжаны алууга мүмкүндүк берет:
- терс кызыктырган патоген үлгүлөрдөн табылбаганда;
- оң ырааттуулугу белгилүү бир патогенге мүнөздүү үлгүлөр табылса.
ПЦРдин оң натыйжасы менен биз диагноз коюлган инфекциянын бар экендиги жөнүндө 95% так айта алабыз. Ошол эле учурда диагностикалык максатта колдонулган ПТР топтомдорунун тактыгы 100% жетет.
Адатта туура эмес жыйынтыктардын 5% адам фактору менен аныкталат. Мисалы, реагенттерди анализдөө жана сактоо техникасын бузуу изилдөөнүн тактыгын бир топ төмөндөтүшү мүмкүн.
Сандык ПТР вирустук жүктөө түшүнүгүн аныктайт. Оорулуудан алынган үлгүлөрдө патоген ДНКсынын канча топтому бар экенин аныктоого болот.
Инфекциянын оордугу алардын санынын көбөйүшүнө түз пропорционалдуу. Вирустук жүктү азайтуу үчүн терапиянын ийгилигин да аныктай аласыз.
ПЦР биоматериалы үчүн тапшыруу
Сандык ПТР клиникада, негизинен эртең менен жүргүзүлөт. Врачка баруу учурунда пациентке эмне керектиги айтылат: кыруу, мазь, заара же кан. ПТР материалдын булгануу деңгээлине карабастан патогендерди аныктай алат.
Оң анализ үчүн теориялык жактан үлгүлөрдө бир гана патогендин болушу талап кылынат. Иш жузунде мындан да ыцгайлуу шарттарды тузууге аракеттенишет. Бул үчүн кээ бир сунуштар бар:
- жыныс органдарынан кыргыч же тампон алсаоргандар, изилдөөгө үч күн калганда интимдик катнаштан баш тартуу керек;
- анализге чейин антибактериалдык дарылар менен жууп же жуунууга болбойт;
- заара чыгаруучу каналдан мазок алуудан үч саат мурун, ичегилерди бошотпой, чыдамдуу болушуңуз керек.
Кан тапшырууда бул эрежелерди сактабаңыз.
Сандык ПТР анализинин натыйжалары кандай чечмеленет?
Алынган натыйжаларды сандык баалоо
Бир катар клиникалык кырдаалдарда дарылоонун эффективдүүлүгү жана/же патологиялык процесстин динамикасы көйгөйү пайда болот. Мындай суроолор өзгөчө өнөкөт инфекциясы бар адамдарды (адамдын иммундук жетишсиздигинин вирусу, В жана С гепатити) текшерүүдө актуалдуу. Диагноз коюуда алар ампликондордун (ПЦР продуктылары) топтолушу талданган үлгүдөгү керектүү гендин көчүрмөлөрүнүн болушуна пропорционалдуу экендигине негизделет.
Албетте, сандык ПТРдин жыйынтыгын эске алуу менен атайын ПТР сигналдарынын интенсивдүүлүгүн изилдөө менен гель электрофорези аркылуу жүргүзүлөт. Ошондой эле, алынган натыйжаларды туура сандык баалоо үчүн зарыл шарт болуп, керектүү гендин белгилүү сандагы көчүрмөлөрүн камтыган оң ишенимдүү контролдук үлгүлөр саналат (мисалы, бир ПТР реакциясы үчүн С гепатитинин генинин миң нускасы). Сандык контролдун бир нече сериялык суюлтуулары калибрлөө ийри сызыктарын түзүүгө мүмкүндүк берет жана клиникалык үлгүлөрдөгү клиникалык генокопиялардын мазмунун баалоо үчүн колдонулат.
Сандык ПТРдин аныктамасында негизги жетишкендик түзүлдүжөнөкөй праймерлер менен бир убакта реакция аралашмасына кошулган флуоресценттик ДНК зонддору жана ПЦР процессине өз убагында, башкача айтканда, реалдуу убакыт ПТРине көз салууга мүмкүндүк берет.
TaqMan методологиясы ампликондун ортоңку бөлүгүнө мүнөздүү болгон жана учунда эки энбелгиси бар флуоресценттик ДНК зонддорунун синтезин билдирет. Алардын бири флуоресценттик энбелги, экинчиси бул флуоресценция үчүн өчүрүүчү молекула.
Флюориметрдин жана термоблок-күчөткүчтүн гибриди болгон атайын аппарат ар бир пробиркада флуоресценцияны туруктуу өлчөөчү (реалдуу убакыт ПТР принциби). ПТРдин 20-40 циклинен кийин ар бир үлгү үчүн жеке ийри сызыктар алынат. Сыноо үлгүсүндө камтылган каалаган гендин көчүрмөлөрүнүн санын контролдоо үлгүлөрү менен калибрлөө ийри сызыктарынан эсептөөгө болот.
Ошондой эле флуоресценттик ыкма менен ПТРди ишке ашыруунун маанилүү өзгөчөлүгү жыйынтыктарды эске алууда ПТР аралашмасы бар түтүктөрдү ачуунун кереги жок. Бул бөлмөнүн күчөтүү продуктулары менен булгануу мүмкүнчүлүгүн азайтат жана электрофорез үчүн атайын жумуш аймактарын бөлүүнүн кереги жок.
Сандык ПТР стенограммасы эмнени көрсөтөт?
Эмне ачылууда?
Сандык ПТР сыяктуу ыкма аркылуу гендердеги сапаттык өзгөрүүлөр табылат: инсерциялар, делециялар жана чекиттик мутациялар. Бирок кээ бир тукум куума ооруларда тиешелүү белгилер айрым гендердин мазмунунун өзгөрүшүнө жооп катары пайда болот.
РахматСандык анализ сандык натыйжа берет, көбүнчө IU / мл. Бул сыноо үлгүсүнүн бир миллилитринде эл аралык бирдиктер менен өлчөнгөн патогендин РНКсынын же ДНКсынын белгилүү сандагы көчүрмөлөрү табылганын билдирет.
Инфекциянын чоңдугуна жараша диагноз коюлат. Адатта кан вирустук жүктү аныктоо үчүн текшерилет, анткени оору учурунда вирустар канда эркин кыймылдайт.
Функциялар
Кан анализиндеги сандык ПТР эки өзгөчөлүккө ээ.
- Талдоо пайда болгон ПТР продуктунун мазмунун так аныктоо үчүн флуоресценттик же радиоактивдүү белги менен белгиленген праймерлердин же дезоксирибонуклеозид трифосфаттарынын катышуусунда жүргүзүлөт.
- ПТР процессинде өтө көп ПТР продуктулары пайда боло электе реакцияны эрте бүтүрүңүз. Бул каныктыруунун акыркы этабында, ПЦР продуктулары көп болгондо, ферменттин өзү да, субстраттары да бул реакциянын чектөөчү звеносу катары кызмат кылат. Мындай шарттарда кийинки ПТР циклинин аягы мындан ары ПТР продуктуларынын санынын эки эсеге көбөйүшү менен мүнөздөлбөйт, ар кандай үлгүлөрдүн ортосундагы анча чоң эмес сандык айырмачылыктар түзүлөт, алар бир катар реакция циклдеринен өткөндөн кийин алгачкы этаптарда так аныкталган..
ПЦР диагностикасынын баасы
ПТР изилдөөнүн баасы бар, ал кандай инфекция текшериле турганына, анализдин методологиясына жана тест материалына жараша болот. Бир инфекцияны аныктоо үчүн, сиз ичине беришиңиз керек200-800 руб. Биоматериал алуу үчүн дагы төлөм кошулат - болжол менен 400 рубль.
